領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：對(duì)1 株新的變形桿菌（Proteus）噬菌體進(jìn)行分離、鑒定與生物學(xué)特性及基因組分析。方法：將實(shí)驗(yàn)室從牦牛屠宰環(huán)節(jié)中分離到的菌株純培養(yǎng)后，對(duì)其DNA提取進(jìn)行16S rRNA測(cè)序，鑒定獲得宿主菌，采集四川成都牦牛屠宰場(chǎng)環(huán)境污水，以獲得的宿主菌進(jìn)行噬菌體分離；運(yùn)用雙層瓊脂平板法進(jìn)行噬菌體的分離純化，測(cè)定噬菌體的最佳感染復(fù)數(shù)、一步生長曲線和噬菌體耐受性等；通過磷酸負(fù)染、透射電鏡觀察噬菌體的形態(tài)；采用試劑盒提取噬菌體全基因組DNA，使用Illumina MiSeq測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行噬菌體全基因組測(cè)序，對(duì)噬菌體全基因組序列進(jìn)行組裝、注釋和基因組學(xué)分析。結(jié)果：從67 株分離菌株中鑒定出10 株P(guān)roteus，并從污水中分離得到1 株可裂解變形桿菌和糞腸球菌（Enterococcus faecalis）并且裂解性較強(qiáng)的噬菌體，命名為Proteus phage PV66；其最佳感染復(fù)數(shù)為0.1，一步生長曲線結(jié)果顯示，感染宿主菌的潛伏期約為10 min，裂解期約為80 min，平均裂解量為321 PFU/cell；耐受pH值范圍為3～12，耐受溫度為65 ℃。電鏡觀察該噬菌體為C3形態(tài)噬菌體，其頭部長（140±1）nm、寬（54±2）nm，尾部長為（36±1）nm。基因組測(cè)序結(jié)果表明PV66全序列長度為90 492 bp，系統(tǒng)發(fā)育樹分析發(fā)現(xiàn)該噬菌體與奇異變形桿菌（P. mirabilis）噬菌體和克諾羅桿菌（Cronobacter）噬菌體同源性較高，與non-Kuravirus屬處于同一分支。結(jié)論：本研究分離到1 株新的變形桿菌噬菌體并具有良好的應(yīng)用潛力，為進(jìn)一步開發(fā)噬菌體類新型抗菌劑提供基礎(chǔ)，同時(shí)也豐富了變形桿菌噬菌體的數(shù)據(jù)庫。
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