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PCR-DGGE技術(shù)在乳酸菌檢測中的條件研究
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 123 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 馬俊孝, 孔健
關(guān)鍵詞: 變性梯度凝膠電泳; 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng); 乳酸菌; V3可變區(qū)域;
摘要:

變性梯度凝膠電泳技術(shù)廣泛應(yīng)用于微生物生態(tài)學(xué)的研究,最近也滲透到食品微生物學(xué)領(lǐng)域。為了檢測發(fā)酵乳制品中乳酸菌的組成及動態(tài)變化,本實驗對PCR-DGGE技術(shù)在乳酸菌檢測中所需要的條件如變性劑梯度、電泳時間進(jìn)行研究。結(jié)果表明,變性劑梯度在30%~55%,電泳時間為200min時,能夠有效分離乳酸菌的16SrRNA基因的V3區(qū)域。在此基礎(chǔ)上,就PCR技術(shù)對染色體DNA混合模板的擴(kuò)增效率進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),常規(guī)PCR技術(shù)與降落PCR技術(shù)對乳酸菌16SrRNA基因V3區(qū)域的擴(kuò)增沒有差異,而細(xì)菌通用引物對乳酸菌模板DNA的識別和擴(kuò)增具有優(yōu)先和偏愛性,預(yù)示PCR-DGGE技術(shù)用于微生物群體檢測時還應(yīng)選用乳酸菌引物進(jìn)行佐證。

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