以豬肌肉干細(xì)胞為研究對象,通過接種4 組不同初始密度(2.7×103、5.4×103、1.1×104 cells/cm2和2.2×104 cells/cm2)細(xì)胞培養(yǎng)3 d,探究高密度條件對豬肌肉干細(xì)胞命運的影響,其中2.7×103 cells/cm2組為對照組。計數(shù)結(jié)果表明,豬肌肉干細(xì)胞適宜的培養(yǎng)密度為2×104~3×104 cells/cm2,超出此范圍造成了增殖相關(guān)蛋白p-ERK1/2的下調(diào),從而產(chǎn)生增殖抑制效應(yīng);轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示最高密度組與對照組相比共有2 125 個差異表達(dá)基因,主要富集在細(xì)胞衰老、細(xì)胞周期和PI3K-Akt等信號通路;深入研究轉(zhuǎn)錄組學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn),高密度條件下干性基因PAX7、PAX3和靜息相關(guān)基因SPRY1表達(dá)上調(diào);分化基因MYOD、MYOG、MYH3和衰老基因P21、P53、P15出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)。實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)和Western Blot結(jié)果顯示,隨著接種密度升高,干性基因PAX7和SPRY1、分化基因MYOG、衰老基因P21均出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)。以上結(jié)果表明,豬肌肉干細(xì)胞在高密度條件下,會出現(xiàn)重返靜息狀態(tài)、分化和衰老等多種細(xì)胞命運。本研究結(jié)果有助于理解高密度下細(xì)胞命運決定機制,為細(xì)胞培養(yǎng)肉研究在高密度條件下調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化提供一定的理論基礎(chǔ)。
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