目的:研究榆干離褶傘溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)對(duì)大鼠動(dòng)脈血栓形成的抑制作用及其機(jī)制。方法:將SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和LUFE低、高劑量組,除假手術(shù)組以外,其余4 組均以三氯化鐵建立頸動(dòng)脈血栓模型。造模前陽(yáng)性對(duì)照組和LUFE低、高劑量組分別以10 mg/kg mb阿司匹林以及100、400 mg/kg mb LUFE灌胃7 d。觀察血栓質(zhì)量和頸動(dòng)脈血管組織病理變化;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)、可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(soluble thrombomodulin,sTM)、E-選擇素和組織因子(tissue factor,TF)水平;流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板CD62P表達(dá)水平。為觀察LUFE對(duì)血小板功能的影響,在體外以膠原誘導(dǎo)血小板活化,觀察LUFE對(duì)大鼠富血小板血漿中P-選擇素、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)和血小板膜糖蛋白IIbIIIa(glycoprotein IIbIIIa,GPIIbIIIa)水平的影響;Western blot方法觀察LUFE對(duì)大鼠血小板磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)表達(dá)水平的影響。結(jié)果:LUFE能明顯減輕血栓質(zhì)量和血管受損程度,抑制血栓模型大鼠血清sTM、E-選擇素、TF、TNF-α、IL-6和PAF水平的上調(diào),下調(diào)血小板CD62P的表達(dá)。同時(shí),在體外LUFE能夠下調(diào)膠原誘導(dǎo)的富血小板血漿中P-選擇素、β-TG和GPIIbIIIa水平,下調(diào)血小板PI3K、Akt和p38 MAPK蛋白的磷酸化水平。結(jié)論:LUFE具有抗血栓作用,其機(jī)制可能與LUFE對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用以及對(duì)血小板活化的抑制作用有關(guān)。
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