通過(guò)單因素試驗(yàn)、Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析法優(yōu)化酸性蛋白酶水解末水壇紫菜蛋白工藝,并測(cè)定不同水解時(shí)間的酶解產(chǎn)物體外抗氧化活性與分子質(zhì)量分布。結(jié)果表明:當(dāng)水解時(shí)間4 h、底物質(zhì)量濃度2 g/100 mL、加酶量4 240 U/g、pH 3.7、溫度54 ℃的條件下,水解度可高達(dá)11.40%。此外,通過(guò)調(diào)節(jié)水解時(shí)間以控制水解度,探討了水解度與酶解產(chǎn)物抗氧化活性的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)當(dāng)水解時(shí)間為4 h、水解度為11.40%時(shí),酶解產(chǎn)物對(duì)1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除活性最強(qiáng),其清除DPPH自由基的半抑制率質(zhì)量濃度為0.68 mg/mL,分子質(zhì)量小于1 kDa的小分子肽占總量的73.46%。同時(shí),采用凝膠色譜層析對(duì)末水壇紫菜酶解產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化,得到末水壇紫菜抗氧化肽(Porphyra haitanensis antioxidant peptide,PHAP),其質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí)對(duì)DPPH自由基的清除率為73.32%,對(duì)羥自由基的清除率為30.15%。最后通過(guò)建立H2O2誘導(dǎo)人肝癌HepG2細(xì)胞的氧化應(yīng)激模型,證實(shí)了PHAP對(duì)HepG2細(xì)胞的氧化損傷具有修復(fù)作用,可增強(qiáng)超氧化物歧化酶的活性,降低脂肪氧化產(chǎn)物丙二醛的含量。
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