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—— 中國食品雜志社
利用Red同源重組技術敲除大腸桿菌BL21（DE3）的ptsG基因，得到ptsG基因缺失菌株BL21（DE3）ΔptsG。構(gòu)建重組質(zhì)粒，得到表達大腸桿菌絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶（serine hydroxymethyltransferase，SHMT）工程菌株BL21（DE3）/pET-glyA、BL21（DE3）ΔptsG/pET-glyA，及共表達SHMT和透明顫菌血紅蛋白（Vitreoscilla hemoglobin，VHb）工程菌株BL21（DE3）ΔptsG/pET-SV。在LB培養(yǎng)基中，BL21（DE3）ΔptsG/pET-glyA菌株與BL21（DE3）/pET-glyA菌株生長情況沒有明顯差異，BL21（DE3）ΔptsG/pET-SV菌株穩(wěn)定期的OD600 nm值比BL21（DE3）ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.3%，在LBG培養(yǎng)基中，穩(wěn)定期BL21（DE3）ΔptsG/pET-glyA菌株OD600 nm值比BL21（DE3）/pET-glyA菌株提高了19.4%，BL21（DE3）ΔptsG/pET-SV菌株OD600 nm值比BL21（DE3）ΔptsG/pET-glyA菌株提高了21.5%。在LBG培養(yǎng)基中，經(jīng)過異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導，與對照菌株BL21（DE3）/pET-28a相比較，兩種單表達工程菌株產(chǎn)SHMT活力分別是其6.4 倍和7.7 倍，共表達工程菌株產(chǎn)SHMT活力是其9.6 倍。實驗結(jié)果表明，敲除ptsG基因能夠增加大腸桿菌在含葡萄糖培養(yǎng)基中的生長量及SHMT表達量，共表達VHb能進一步提高菌株生長量和SHMT產(chǎn)量。
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