比較常壓下酶水解與超高壓下酶水解蝦原肌球蛋白(tropomyosin,TM)的致敏性差異及線性表位的殘留,探討超高壓下酶水解TM增強(qiáng)致敏性消減效果的原因。采用間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)TM致敏性,傅里葉變換紅外光譜和熒光光譜法檢測(cè)TM二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu);以致敏性(OD492?nm)為指標(biāo),確定常壓和超高壓下酶水解TM的條件;采用質(zhì)譜法檢測(cè)水解片段的氨基酸序列。結(jié)果表明,在40?℃、200?MPa下,保壓時(shí)間30?min有利于胰蛋白酶活力的提高;壓力在100~600?MPa內(nèi),TM致敏性隨壓力升高而降低,其致敏性與二級(jí)結(jié)構(gòu)中β-轉(zhuǎn)角的相對(duì)含量及三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化有關(guān);在常壓下(40?℃、酶添加量3?000?U/g、水解30?min),TM水解產(chǎn)物的致敏性消減率為89%,水解產(chǎn)物中含8~16?個(gè)氨基酸殘基的片段數(shù)量占76.8%,且線性表位的消減率為60.0%~66.7%;在超高壓下(40?℃、酶添加量3?000?U/g、200?MPa下水解30?min),TM水解產(chǎn)物的致敏性消減率為98%,水解產(chǎn)物中含8~16?個(gè)氨基酸殘基的片段數(shù)量占93.3%,且線性表位的消減率為88.9%~90.0%。因此,超高壓可以促進(jìn)酶水解TM,有利于線性表位的消除,從而降低水解產(chǎn)物的致敏性。
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