采用超濾、離子交換層析分離辣木籽蛋白酶解產(chǎn)物,以血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制率為評價指標(biāo),篩選具有較高降壓活性的肽組分,并通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定其肽序列,結(jié)合生物信息學(xué)和分子對接技術(shù)篩選出潛在的ACE抑制肽,進(jìn)一步利用傅里葉變換紅外光譜、酶反應(yīng)抑制劑動力學(xué)和四甲基偶氮唑藍(lán)法實(shí)驗(yàn)解析其二級結(jié)構(gòu)特征及體外活性。結(jié)果表明:分離得到的F-b肽組分具有較好的降壓效果,共鑒定出11 條肽序列,進(jìn)一步篩選出肽QGPRPQ為潛在的ACE抑制肽(IC50=(1.15±0.3)mmol/L),分子對接表明QGPRPQ可以與ACE以氫鍵、疏水作用更好地結(jié)合;二級結(jié)構(gòu)分析表明QGPRPQ由22.8% α-螺旋、33.3% β-折疊和43.9% β-轉(zhuǎn)角構(gòu)成;QGPRPQ的抑制模型為混合型抑制,且質(zhì)量濃度低于0.01 mg/mL時對HepG2細(xì)胞無毒性作用。該研究可為辣木籽蛋白源降壓肽的開發(fā)利用提供一定的理論參考。
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