本研究以褐藻膠為底物,探究其在褐藻膠酶法降解過(guò)程中的分子質(zhì)量變化以及酶法降解制備褐藻膠低聚糖的工藝參數(shù),并在此基礎(chǔ)上,評(píng)價(jià)了不同分子質(zhì)量褐藻膠酶解產(chǎn)物的體外免疫活性。結(jié)果表明,褐藻膠經(jīng)褐藻膠裂解酶降解后分子質(zhì)量顯著下降,通過(guò)乙醇分級(jí)分離可獲得3 種不同分子質(zhì)量的降解產(chǎn)物,其重均分子質(zhì)量分別為13.4、5.73 kDa和3.85 kDa。單因素試驗(yàn)優(yōu)化獲得酶法制備褐藻膠低聚糖的最適工藝參數(shù)為pH 7.0、褐藻膠裂解酶用量15 U/g(底物質(zhì)量計(jì))、酶解時(shí)間24 h,此時(shí),褐藻膠低聚糖得率為28.05%。利用小鼠巨噬細(xì)胞模型對(duì)褐藻膠及其3 種分子質(zhì)量降解產(chǎn)物的體外免疫活性進(jìn)行評(píng)價(jià),發(fā)現(xiàn)褐藻膠及其酶解產(chǎn)物均具有一定的免疫增強(qiáng)活性,且重均分子質(zhì)量為5.73 kDa的酶解組分免疫增強(qiáng)活性最好,優(yōu)于褐藻膠低聚糖。同時(shí),通過(guò)添加巨噬細(xì)胞受體蛋白Toll樣受體4(Toll-like receptor 4,TLR4)的阻斷劑(TAK-242),驗(yàn)證了褐藻膠酶解產(chǎn)物通過(guò)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞TLR4的分泌,引起級(jí)聯(lián)反應(yīng),增加NO、腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素6的分泌,從而調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫活性。研究結(jié)果可為褐藻膠高值化利用提供理論依據(jù)。
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