探討青蛤多肽的制備工藝及體外抗前列腺癌DU-145細(xì)胞的活性。以氨基氮含量為檢測指標(biāo),篩選最優(yōu)酶種類并進(jìn)行正交試驗以獲取最佳酶解青蛤內(nèi)臟酶解工藝。經(jīng)超濾截留、瓊脂糖凝膠層析、高效液相色譜分離純化及噻唑藍(lán)(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)活性篩選得到含有5 個氨基酸的多肽(Ile-Leu-Tyr-Met-Pro)。對所得多肽采用MTT法測定DU-145細(xì)胞增殖抑制率;采用倒置顯微鏡、Hoechst 33258染色及透射電子顯微鏡技術(shù)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;采用熒光法檢測細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用線粒體膜電位檢測DU-145細(xì)胞凋亡情況;采用免疫組織化學(xué)法檢測非轉(zhuǎn)移性克隆23型(nm23H1)蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:制備青蛤多肽最佳酶是木瓜蛋白酶,最佳酶解條件是料液比1:4、pH 7.0、加酶量1 500 U/g、溫度45.0 ℃、酶解時間4 h;所得多肽對DU-145細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用,且呈時間與劑量依賴性;處理后的DU-145細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)學(xué)特征;其質(zhì)量濃度和細(xì)胞內(nèi)ROS的表達(dá)量呈正相關(guān)關(guān)系;線粒體膜電位降低率從4.22%提高到25.07%;免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示nm23H1蛋白的表達(dá)量增加。青蛤多肽能明顯抑制DU-145細(xì)胞的增殖,并通過誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡而發(fā)揮作用。
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