目的:對(duì)從泡葉藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡葉藻聚糖進(jìn)行化學(xué)法降解,將得到的低分子質(zhì)量降解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化,分析其基本組成特征和體外免疫誘導(dǎo)活性,為泡葉藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本結(jié)構(gòu)特征研究提供參考。方法:通過酸水解法和雙氧水氧化降解法制備泡葉藻聚糖低分子質(zhì)量降解片段,利用超濾法和Sephadex G-50凝膠柱層析分離純化得到4 個(gè)泡葉藻聚糖低分子質(zhì)量片段:HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2;采用對(duì)氨基苯甲酸乙酯柱前衍生樣品后進(jìn)行高效液相色譜及化學(xué)方法分析其單糖組成和化學(xué)組成;采用高效分子排阻色譜法測(cè)定其重均分子質(zhì)量;通過小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7模型分析HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2的體外免疫誘導(dǎo)活性。結(jié)果:泡葉藻聚糖低分子質(zhì)量片段的組成特征表明HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2均為雜多糖,且單糖組成存在較大差異,其重均分子質(zhì)量分別為4.80、4.20、5.30、2.30 kDa。免疫活性分析細(xì)胞模型結(jié)果表明,HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F2在所測(cè)定質(zhì)量濃度范圍(0~200 μg/mL)內(nèi)能明顯誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞活化,釋放NO和腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),而H2O2-F1誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞釋放NO和TNF-α的活性明顯低于HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2。結(jié)論:泡葉藻聚糖低分子質(zhì)量降解片段(HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2)具有明顯的免疫誘導(dǎo)活性,其中HCl-F1和H2O2-F2的免疫誘導(dǎo)活性明顯高于泡葉藻聚糖。結(jié)合其化學(xué)組成分析的結(jié)果,提示泡葉藻聚糖低分子質(zhì)量降解片段的免疫誘導(dǎo)活性是由單糖組成和硫酸根質(zhì)量分?jǐn)?shù)共同決定的。
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