領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為實現(xiàn)生物質(zhì)的高效降解，制備具有重要生理功能的阿魏酸，本實驗從深綠木霉XS6發(fā)酵液中分離純化深綠木霉阿魏酸酯酶（Trichoderma atroatroviride feruloyl esterase，TaFAE），并研究酶學(xué)特性。發(fā)酵液經(jīng)(NH4)2SO4沉淀、DEAE-Cellulose DE52陰離子交換層析和Sephadex G-200凝膠過濾層析后，得到電泳純的TaFAE，比活力134.3 U/mg，回收率28.9%，純化倍數(shù)31.52。經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰氨凝膠電泳測得酶分子質(zhì)量約為66.4 kDa。TaFAE對阿魏酸甲酯親和力最高，以其為底物，酶Km值和Vmax值分別為0.53 mmol/L和16.74 μmol/（min·mg）。以芥子酸甲酯為底物，酶促反應(yīng)速率最大，達(dá)到32.21 μmol/（min·mg），是阿魏酸甲酯的2 倍，對咖啡酸甲酯無活性，說明該酶具有嚴(yán)格的底物特異性。TaFAE最適pH值和溫度分別為pH 4.0和40 ℃。在pH 2.0～9.0的范圍內(nèi)，30～40 ℃溫度下都表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。金屬離子Ca2＋和Mg2＋對TaFAE活性有顯著激活作用，重金屬離子Hg2＋和Pb2＋幾乎完全抑制酶活性；β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇、十二烷基硫酸鈉、Trition X-100增強(qiáng)酶活性，苯甲基磺酰氟有較強(qiáng)的抑制作用。木聚糖酶降解生物質(zhì)的體系中加入TaFAE可顯著增加阿魏酸和還原糖產(chǎn)量，表明TaFAE和木聚糖酶有良好協(xié)同作用。綜上所述，TaFAE優(yōu)良的耐酸性及其他酶學(xué)性質(zhì)說明其在食品和飼料行業(yè)有較好的應(yīng)用潛力。
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