領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
旨在實(shí)現(xiàn)嗜熱毛殼菌（Chaetomium thermophilum）中的甘露聚糖酶CtMan26在畢赤酵母（Pichia pastoris）中高效表達(dá)，探究重組酶CtMan26的酶學(xué)性質(zhì)及在甘露寡糖（mannooligosaccharides，MOS）制備中的潛力。甘露聚糖酶CtMan26共含448 個氨基酸，由碳水化合物結(jié)合模塊CBM35、Linker及GH26家族的催化域模塊組成，催化結(jié)構(gòu)域上的Asp-395、Leu-396和CBM35輔助模塊上的Leu-100受到多個疏水作用力，并可與Linker上氨基酸形成多個氫鍵。重組酶CtMan26經(jīng)P. pastoris表達(dá)后，存在N-糖基化修飾，蛋白表觀分子質(zhì)量約為55 kDa。重組酶CtMan26的最適溫度為55 ℃，最適pH值為5.0，50、60 ℃處理1 h后酶活力仍保持在90%以上，在pH 4.0～12.0范圍表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。以魔芋甘露聚糖為底物時，重組酶CtMan26的比活力為23.15 U/mg，米氏常數(shù)為4.75 mg/mL，最大反應(yīng)速度為27.17 μmol/（min·mg）。重組酶CtMan26制備的MOS主要為甘露糖（14.2 mg/L）、甘露二糖（20.1 mg/L）、甘露三糖（6.1 mg/L）和甘露四糖（2.5 mg/L）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，制備的MOS表現(xiàn)出較好的抗氧化能力，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為2.4 mg/mL時，對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、2,2’-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)陽離子自由基清除率、羥自由基清除率以及超氧陰離子自由基清除率分別為（90.80±0.65）%、（80.7±1.07）%、（69.10±1.10）%和（76.7±3.14）%。同時，MOS具有明顯的益生元特性，能夠抑制大腸桿菌（Escherichia coli）的生長，促進(jìn)有益菌戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）和植物乳桿菌（Lactobacillu plantarum）的生長，且隨著MOS添加量增加及培養(yǎng)時間的延長越發(fā)明顯。綜上所述，重組甘露聚糖酶CtMan26具有較好的酶學(xué)特性，在MOS的制備中具有潛在的應(yīng)用價值。
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