為快速多重篩查嬰兒配方乳粉中食源性致病菌的污染情況,建立克羅諾桿菌、沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌及金黃色葡萄球菌雙重酶促重組等溫?cái)U(kuò)增(enzymatic recombinase amplification,ERA)快速檢測(cè)方法。首先,通過篩選確定對(duì)4 種食源性致病菌特異性好、擴(kuò)增效率高的引物探針。經(jīng)過優(yōu)化建立兩組雙重ERA檢測(cè)體系可快速篩查4 種食源性致病菌。該方法對(duì)沙門氏菌、單核細(xì)胞增生李斯特菌及金黃色葡萄球菌的檢出限均為10-2 ng/μL;對(duì)克羅諾桿菌的檢出限為1 ng/μL。模擬污染實(shí)驗(yàn)顯示,污染量為1 CFU/mL的樣品增菌培養(yǎng)6 h后,可檢出4 種致病菌。應(yīng)用該方法對(duì)市售嬰兒配方乳粉樣品進(jìn)行檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)法一致,證實(shí)了本研究建立的雙重ERA檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和可靠性。采用本方法僅需20 min左右即可一次性檢出4 種致病菌,相較于傳統(tǒng)的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法以及實(shí)時(shí)熒光PCR法顯著提高了檢測(cè)效率,對(duì)于推進(jìn)食源性致病菌的快速篩查具有重要意義。
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