以轉(zhuǎn)基因克螟稻品系為研究對(duì)象,通過(guò)大米內(nèi)源蔗糖磷酸合成酶基因和轉(zhuǎn)基因克螟稻品系特異性序列的絕對(duì)拷貝數(shù)分析,建立轉(zhuǎn)基因克螟稻成分的雙重?cái)?shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)定量分析方法。本研究中轉(zhuǎn)基因克螟稻定量體系中最適DNA添加量在10 pg~13 ng之間,模板斷裂程度、PCR擴(kuò)增退火溫度等因素對(duì)定量結(jié)果的影響不大。其定量的絕對(duì)靈敏度達(dá)1 copies/μL,可在微滴式和芯片式數(shù)字PCR平臺(tái)上準(zhǔn)確檢測(cè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)在0.1%~100%之間的轉(zhuǎn)基因克螟稻成分,尤其是對(duì)低于1%的樣品,其定量準(zhǔn)確性高于傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光PCR方法。本研究建立的轉(zhuǎn)基因克螟稻成分定量分析方法適用性較好,可用于轉(zhuǎn)基因水稻規(guī)范化與標(biāo)準(zhǔn)化的定量分析。
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