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乳酸菌飲料中嗜酸乳桿菌的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 160 發(fā)表時(shí)間: 2019-06-11
作者: 張娜娜,劉 洋,俞 漪,趙 渝,竇同海,徐 瓊,段文鋒,翁史昱
關(guān)鍵詞: 實(shí)時(shí)熒光定量PCR;嗜酸乳桿菌;定量;檢測(cè)
摘要:

目的:為快速準(zhǔn)確檢測(cè)乳酸菌飲料中的嗜酸乳桿菌,建立實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)方法。方法:根據(jù)嗜酸乳桿菌NCFM的SPIDR保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物與探針,借助建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行特異性、靈敏度、重復(fù)性以及抗干擾能力驗(yàn)證,并利用模擬樣品對(duì)方法進(jìn)行檢驗(yàn),最后對(duì)市售的實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:該方法的特異性較好;方法的絕對(duì)靈敏度達(dá)到3pg,相對(duì)靈敏度達(dá)103 CFU/mL;重復(fù)性檢測(cè)表明相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.6%以下。同時(shí)進(jìn)行雜菌干擾實(shí)驗(yàn),在純基因組水平和培養(yǎng)物水平混合大腸桿菌,擴(kuò)增均無明顯影響,表明建立的方法抗干擾能力較好。利用建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)模擬樣品進(jìn)行檢測(cè)并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得出R2為0.987,線性較好,可進(jìn)行實(shí)際樣品的檢測(cè)。對(duì)市售的11 份樣品進(jìn)行檢測(cè),其中6 份含有嗜酸乳桿菌菌株,5份不含嗜酸乳桿菌菌株,標(biāo)記嗜酸乳桿菌的樣品全部檢測(cè)出嗜酸乳桿菌且含量在5.83×102~3.68×104 CFU/mL之間。結(jié)論:建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出乳酸菌飲料中嗜酸乳桿菌。

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