采用硫酸銨沉淀、Q-HP陰離子交換柱和Superdux 75凝膠柱等技術(shù),從醬油大曲中純化得到一種耐鹽蛋白酶,經(jīng)飛行時間質(zhì)譜鑒定為鈣蛋白酶RIM13,屬于一種半胱氨酸蛋白酶。該蛋白酶的最適溫度為50?℃;最適pH值為6.5;穩(wěn)定溫度為40?℃;穩(wěn)定pH值為7.0;Mn2+促進蛋白酶活力,F(xiàn)e3+、Fe2+、Cu2+、Ca2+、K+、Na+抑制蛋白酶活力,以上金屬離子對蛋白酶二級結(jié)構(gòu)也產(chǎn)生不同程度的影響;米氏常數(shù)Km為2.43?g/L,最大反應速率Vm為103.09?mg/(L·min)。在5、10?g/100?mL和15?g/100?mL的NaCl質(zhì)量濃度條件下,蛋白酶保留的酶活力分別為77.22%、54.39%以及41.15%。該蛋白酶在高鹽度環(huán)境下保持較高的酶活力,因此具有潛在的工業(yè)應用價值。
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