領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
以1 株產(chǎn)γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）BC114谷氨酸脫羧酶為研究對象，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）技術(shù)獲得該酶基因，對其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21（DE3）中實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、聚丙烯酰胺凝膠電泳和高效液相色譜分別測定重組菌不同發(fā)酵時(shí)間點(diǎn)谷氨酸脫羧酶基因的表達(dá)量、蛋白表達(dá)量以及產(chǎn)GABA能力。結(jié)果表明：植物乳桿菌中谷氨酸脫羧酶基因大小為1?410?bp，編碼469?個(gè)氨基酸，蛋白二級結(jié)構(gòu)由α-螺旋（32.2%）、β-折疊（11.5%）和無規(guī)則卷曲（56.3%）構(gòu)成，完成了該酶的三維結(jié)構(gòu)同源建模；成功構(gòu)建了重組谷氨酸脫羧酶大腸桿菌，谷氨酸脫羧酶基因在誘導(dǎo)6?h相對表達(dá)量最大，而蛋白表達(dá)量較基因在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量有一定滯后，在8?h達(dá)最大值，此時(shí)GABA產(chǎn)量也達(dá)最高，為2?387?mg/L。
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