目的:研究草蓯蓉多糖(Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS)對(duì)氧化應(yīng)激所致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡 的抑制作用。方法:利用叔丁基過(guò)氧化氫(tert-butyl hydroperoxide,tBHP)損傷人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞制備細(xì)胞 氧化應(yīng)激損傷模型,采用四甲基偶氮唑鹽(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞存 活率,分光光度法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛(malondialdelyde,MDA)水平、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力和還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)水平。采用二氯熒光乙酰乙酸鹽(dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,采用JC-1熒光染色法觀察 細(xì)胞線粒體跨膜電位(mitochondrial membrane potentials,ΔΨm)水平,采用Hoechst染色和原位末端標(biāo)記(TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法觀察細(xì)胞凋亡情況。Western blot法檢測(cè)細(xì)胞Bax、Bcl-2、細(xì)胞色素c (cytochrome c,Cyt c)、Bid片段(truncated Bid,tBid)、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果:BRPS提高tBHP損傷的內(nèi)皮細(xì)胞存活率,降低細(xì)胞ROS水平,減少M(fèi)DA生成,提高SOD活性與GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制細(xì)胞凋亡。Western blot結(jié)果顯示,BRPS降低胞漿Cyt c、線粒體tBid水平,減小細(xì)胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。結(jié)論:BRPS對(duì)氧化應(yīng)激所致血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有 抑制作用,機(jī)制可能與線粒體凋亡途徑和死亡受體途徑均有關(guān)。
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