研發(fā)可同時檢測鮮切果蔬中的單核細胞性李斯特菌、鼠傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌O157:H7的多重聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測方法。根據(jù)單核細胞性李斯特菌inlA基因、鼠傷寒沙門菌invA基因、大腸桿菌O157:H7 wzy基因、金黃色葡萄球菌nuc基因設(shè)計及篩選出4?對引物。對多重PCR體系及條件進行優(yōu)化。該方法對單核細胞性李斯特菌、鼠傷寒沙門菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌O157:H7的檢出限分別為3.5×106、1.6×105、2.4×105、4.8×105?CFU/mL。將優(yōu)化的多重PCR方法對不同接種量富集后驗證,結(jié)果表明,經(jīng)過9?h富集后,該方法檢出限為1?CFU/mL。該方法在鮮切萵苣、鮮切黃瓜、鮮切木瓜、鮮切哈密瓜中應(yīng)用同樣可擴增出4?條目標菌。因此,利用所建立的多重PCR方法對鮮切果蔬中侵染的病原菌檢出限可達到1?CFU/g。該方法相較于傳統(tǒng)的培養(yǎng)檢測方法具有節(jié)約大量的勞力、試劑、時間等優(yōu)點,檢測時間也由原來的5~7?d縮短至9~11?h,對于企業(yè)或分析檢驗中心大批量樣品的監(jiān)測具有指導(dǎo)意義。
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