液體培養(yǎng)發(fā)菜細(xì)胞,發(fā)菜細(xì)胞經(jīng)去藻體、濃縮、透析、脫蛋白、醇沉、DEAE-52離子交換柱層析分級、Sephadex-100葡聚糖凝膠柱分級處理得到發(fā)菜胞外精多糖。以硫酸根的取代度為指標(biāo),在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,利用Box-Behnken設(shè)計(jì)進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn),建立因素與響應(yīng)值之間的數(shù)學(xué)模型,確定適宜的發(fā)菜胞外多糖硫酸化條件。結(jié)果表明,發(fā)菜胞外多糖硫酸化修飾最佳條件為反應(yīng)溫度71 ℃、反應(yīng)時間3 h、氯磺酸-吡啶體積比1∶7,在此條件下,硫酸化取代度為5.05。紅外光譜檢測表明,硫酸基團(tuán)已與多糖分子結(jié)合。
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