基于人結(jié)腸癌細(xì)胞系Caco-2細(xì)胞建立外源核酸的吸收模型,并在此模型的基礎(chǔ)上探究質(zhì)粒DNA的腸道吸收機制。在Transwell孔膜上培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞21 d后,通過透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、監(jiān)測培養(yǎng)期間跨膜電阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值、測定熒光黃透過率評價細(xì)胞模型是否成功建成;通過細(xì)胞毒性實驗探究質(zhì)粒對細(xì)胞生長的影響;將質(zhì)粒DNA加入細(xì)胞模型中進(jìn)行雙向轉(zhuǎn)運實驗,探究質(zhì)粒的腸道吸收規(guī)律;在低溫和添加特異性抑制劑條件下進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)運實驗,進(jìn)一步推測質(zhì)粒的腸道吸收機制。結(jié)果表明,細(xì)胞分化形態(tài)良好、TEER值及熒光黃表觀透過系數(shù)(apparent permeability coefficient,Papp)均符合要求,細(xì)胞模型可用于轉(zhuǎn)運實驗;質(zhì)粒對細(xì)胞生長無顯著抑制作用,可用于轉(zhuǎn)運實驗;隨著時間的延長,質(zhì)粒在模型兩方向上的轉(zhuǎn)運均呈逐漸飽和趨勢,Papp(腸腔側(cè)(apical,AP)→基底側(cè)(basolateral,BL))遠(yuǎn)大于Papp(BL→AP),提示質(zhì)粒的轉(zhuǎn)運受到某種載體蛋白的介導(dǎo),膜介導(dǎo)的跨細(xì)胞運輸方式可能參與其中;在低溫和添加特異性抑制劑條件下,質(zhì)粒的轉(zhuǎn)運均受到顯著抑制,進(jìn)一步表明該過程是一個跨細(xì)胞方式的主動運輸過程。
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