為了提高地衣芽孢桿菌肽產(chǎn)量,采用全基因組改組技術(shù)進(jìn)行菌株選育。以地衣芽孢桿菌TJ12為原始菌株,通過(guò)紫外誘變、亞硝基胍誘變、常壓室溫等離子體誘變構(gòu)建了TJ12菌的突變體庫(kù)。在優(yōu)化其原生質(zhì)體制備和再生條件的基礎(chǔ)上,以其中4 株誘變菌株(U11、U23、H1、L71)作為親本,采用聚乙二醇介導(dǎo)的方法進(jìn)行3 輪多親本的全基因組改組,同時(shí),結(jié)合雙親滅活的篩選方法,最終選出1 株桿菌肽產(chǎn)量提高并能穩(wěn)定遺傳的優(yōu)良菌株F3,對(duì)其搖瓶發(fā)酵36 h,桿菌肽A產(chǎn)量達(dá)760 mg/L,為野生菌株TJ12的1.7 倍。與野生菌株TJ12相比,改組菌株提前進(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期,兩者發(fā)酵過(guò)程pH值幾乎無(wú)差異;最終改組菌生長(zhǎng)量雖低于野生菌,但菌株單位細(xì)胞還原糖產(chǎn)量及桿菌肽產(chǎn)量都高于野生菌株;其合成基因和調(diào)控基因表達(dá)量相對(duì)野生菌株都上調(diào),其中合成基因上調(diào)幅度較大。推測(cè)改組菌株自身有了更強(qiáng)大的桿菌肽耐受機(jī)制,且合成基因相關(guān)部位可能發(fā)生了改變。
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