以玉米蛋白為原料,制備活性環(huán)(組氨酸-脯氨酸)二肽(cyclo(His-Pro))前體——His-Pro和Pro-His二肽。分別采用堿性蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶和木瓜蛋白酶對提取的玉米γ-醇溶蛋白進(jìn)行單酶和雙酶分步水解,篩選出最佳酶解工藝。采用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶分步水解的水解產(chǎn)物中cyclo(His-Pro)前體的含量比其他水解產(chǎn)物要高。采用響應(yīng)面和L16(45)正交試驗(yàn)對堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶分步水解γ-醇溶蛋白的工藝進(jìn)行了優(yōu)化,最佳水解條件為:底物質(zhì)量濃度32 mg/mL,先加入12 100 U/g的堿性蛋白酶水解6.5 h,再加入17 000 U/g的風(fēng)味蛋白酶于pH 7.5、55 ℃條件下水解6 h。采用超高效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜法對cyclo(His-Pro)前體進(jìn)行定量和定性分析,結(jié)果表明水解產(chǎn)物中含有較高含量的脯氨酸-組氨酸二肽(6.88 mg/g)。
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