目的:研究秘魯魷魚須脫皮液膠原肽酶解工藝及抗氧化活性。方法:以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率為指標(biāo),利用單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法對(duì)其酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化,并采用2,2’-聯(lián)氮-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt,ABTS)自由基與.OH清除率及亞鐵還原能力評(píng)價(jià)其酶解產(chǎn)物抗氧化活性以及通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和凝膠排阻色譜分析其分子質(zhì)量分布。結(jié)果:最適酶解工藝為酶解溫度50 ℃、初始pH 7.4、底物蛋白質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.2%、酶解時(shí)間3.7 h、酶添加量3 000 U/g。在此條件下,水解度和酶解產(chǎn)物DPPH自由基清除率分別為(37.23±0.08)%和(43.61±0.09)%,對(duì)ABTS+.和.OH清除率的IC50分別為0.37 mg/mL和0.41 mg/mL,且表現(xiàn)出較強(qiáng)的亞鐵還原能力;SDS-PAGE顯示最適酶解工藝下,蛋白質(zhì)基本被水解為小分子多肽;凝膠排阻色譜分析可知,酶解產(chǎn)物分子質(zhì)量在1~5 kD之間。結(jié)論:酶解產(chǎn)物具備較強(qiáng)的抗氧化活性,可作為抗氧化活性物質(zhì)基料,充分開發(fā)利用。
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