基于無(wú)標(biāo)記定量質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)建立了一種新的轉(zhuǎn)基因生物外源蛋白質(zhì)消化穩(wěn)定性評(píng)價(jià)方法。以牛β-乳球蛋白、牛血清白蛋白和大豆胰蛋白酶抑制劑為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),經(jīng)模擬人體胃/腸消化液消化后進(jìn)行凝膠電泳分離,切取目標(biāo)蛋白質(zhì)條帶進(jìn)行酶切,提取肽段進(jìn)行納升液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分析。基于Mascot數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定目標(biāo)蛋白質(zhì)。計(jì)算各消化時(shí)間點(diǎn)蛋白質(zhì)匹配肽段數(shù)與消化前蛋白質(zhì)匹配肽段數(shù)的比值,當(dāng)比值≤0.50時(shí)判斷為目標(biāo)蛋白質(zhì)在該時(shí)間段內(nèi)已消化。將此方法應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)水稻“華恢1號(hào)”外源蛋白Cry1Ab/1Ac的消化穩(wěn)定性分析,結(jié)果顯示在模擬胃液中消化2 min時(shí),比值下降到0.50以下,在模擬腸液中消化15 s后比值下降到0.50以下,表明該蛋白在胃/腸消化液中具有消化不穩(wěn)定性。
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