目的:探究絞股藍(lán)內(nèi)生真菌JY25多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用,為絞股藍(lán)內(nèi)生真菌多糖的應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法:確定4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(4-N-trophenyl-α-D-glu-copyranoside,PNPG)比色法檢測α-葡萄糖苷酶活力的最佳條件,以阿卡波糖為陽性對(duì)照,采用優(yōu)化后的最佳條件測定JY25多糖對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并確定抑制類型、計(jì)算抑制常數(shù);以Caco-2細(xì)胞作為體外產(chǎn)α-葡萄糖苷酶模型,測定JY25多糖的抑制效果。結(jié)果:反應(yīng)時(shí)間30 min、反應(yīng)溫度44 ℃、pH 6.8、底物(PNPG)濃度5 mmol/L為PNPG比色法的最佳反應(yīng)條件。以此優(yōu)化條件進(jìn)行比色,當(dāng)JY25多糖質(zhì)量濃度為6.15 mg/mL時(shí),對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制率達(dá)到最大(68.21%);JY25多糖的半數(shù)抑制濃度(IC50)為(2.46±0.42) mg/mL,抑制常數(shù)Ki為1.15 mg/mL,JY25多糖為競爭性抑制劑。在JY25多糖質(zhì)量濃度為10.00 mg/mL時(shí),對(duì)培養(yǎng)16 d的Caco-2細(xì)胞所產(chǎn)α-葡萄糖苷酶的抑制率達(dá)到16.48%。結(jié)論:體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)JY25多糖具有競爭性抑制α-葡萄糖苷酶的作用。
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