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—— 中國食品雜志社
為了獲得性能優(yōu)良的新型β-甘露聚糖酶，本研究采用基因挖掘技術從米曲霉（Aspergillus oryzae）RIB40基因組中挖掘到了2 個假定的新型GH5家族β-甘露聚糖酶基因，分別命名為Aoman5A和Aoman5B。對這兩條序列做了相關的生物信息學分析，同時借助pPIC9KM質粒將兩個酶的成熟肽編碼基因在Pichia pastoris GS115中實現(xiàn)了表達，并對表達產(chǎn)物進行了純化和鑒定。生物信息學分析的結果表明AoMan5A含有20 個氨基酸殘基的信號肽，而AoMan5B含有21 個氨基酸殘基的信號肽和12 個氨基酸殘基的前導肽；序列比對的結果顯示兩個酶與目前已報道的序列最高的同源性分別為68%和79%，且AoMan5A的N端還攜帶有一個1家族的CBM；三維結構預測的結果顯示，兩者均符合（α/β）8的TIM-桶狀結構。表達鑒定的結果表明，在同樣表達條件下，reAoMan5A和reAoMan5B上清液的酶活力分別為2.9、12.5 IU/mL；純化后它們的酶比活力分別為8.3、104.2 IU/mg，前者的最適溫度為35 ℃，而后者的最適溫度為50 ℃，pH值特性的測定結果表明這兩種酶均為酸性酶。硫酸-苯酚法測得reAoMan5A和reAoMan5B的糖含量分別為25.4%和12.6%，表明這兩種重組酶均經(jīng)過了糖基化修飾。本研究獲得了兩種新型的β-甘露聚糖酶，比較分析了它們的序列特征，并實現(xiàn)了它們的異源表達，為β-甘露聚糖酶的進一步研究及應用奠定了堅實的基礎，也為其他新型酶的基因挖掘提供了可資借鑒的經(jīng)驗。
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