目的:研究并建立產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶茂原鏈霉菌原生質(zhì)體制備技術(shù),通過原生質(zhì)體融合技術(shù)篩選高產(chǎn)菌株。方法:以溶菌酶處理茂原鏈霉菌獲得原生質(zhì)體,采用原生質(zhì)體融合技術(shù),通過96 孔板高通量初篩、試管復(fù)篩、搖瓶驗(yàn)證選育高產(chǎn)菌株。結(jié)果:茂原鏈霉菌形成的原生質(zhì)體再生出的菌落直徑比較小,而菌絲生成的菌落直徑比較大,兩種形態(tài)的菌落96 孔板發(fā)酵后酶活力有顯著性差異。不同的茂原鏈霉菌株制備原生質(zhì)體,酶解程度、原生質(zhì)體純度、再生率有很大的差異,再生率最高可達(dá)1 804.25%,最低僅為12.76%。原生質(zhì)融合后的高產(chǎn)菌株,選取96 孔板初篩酶活力前3%的菌株進(jìn)行試管發(fā)酵,得到高產(chǎn)菌株比例為32.2%,酶活力比親本高22.4%,經(jīng)搖瓶驗(yàn)證產(chǎn)酶比對(duì)照提高16.28%。結(jié)論:利用基因組重排技術(shù),可以初步對(duì)茂原鏈霉菌進(jìn)行高產(chǎn)菌株選育。
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