以海藻酸鈉-淀粉凝膠作固定劑,將Sprague-Dawley(SD)大鼠的小腸回腸組織固定到兩片核微孔膜中間制成“三明治”式傳感膜,然后將其固定到玻碳電極上制成生物傳感電極,通過(guò)電化學(xué)工作站測(cè)定出不同濃度白藜蘆醇刺激其相應(yīng)受體后的響應(yīng)電流。結(jié)果表明:該傳感器對(duì)白藜蘆醇的最低檢測(cè)限為1×10-13 mol/L,在其濃度為8.5×10-12 mol/L時(shí)電流變化率達(dá)到最大值,說(shuō)明此時(shí)白藜蘆醇的受體已經(jīng)被飽和。用Origin軟件對(duì)白藜蘆醇與其受體的作用曲線進(jìn)行雙曲線擬合(R2=0.988 7),然后用雙倒數(shù)法作圖求出白藜蘆醇與其受體的結(jié)合常數(shù)和解離常數(shù)分別為1.207×10-11和1.118×10-12。由此可以估測(cè)出,平均每個(gè)細(xì)胞的受體數(shù)約為85 個(gè)。通過(guò)將白藜蘆醇固定化小腸上皮組織所制成的生物傳感器的響應(yīng)值和白藜蘆醇與裸電極作用的響應(yīng)值比較可知,小腸組織細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇的響應(yīng)值顯然得到了細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞系統(tǒng)的放大作用,其放大倍數(shù)為100 倍。與此同時(shí),細(xì)胞受體明顯賦予該生物傳感器的可飽和性特征,表現(xiàn)為類似于酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)-米氏方程的典型特征。通過(guò)該傳感器第一次定量化測(cè)定了白藜蘆醇與受體互作并向機(jī)體內(nèi)傳遞信號(hào)的動(dòng)力學(xué)規(guī)律,這將為白藜蘆醇受體分析、分離與純化、信號(hào)傳遞及其生物功能評(píng)價(jià)與研究提供新的方法。
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