以鰱魚卵為材料,通過勻漿、酸處理和超濾制備半胱氨酸蛋白酶抑制因子(cystine proteinase inhibitors,CPIs)粗提液,進而經(jīng)Sephacryl S-100分子篩層析、Blue Sepharose 6 Fast Flow染料親和層析、SP-SepharoseFast Flow陽離子交換層析、ConA Sepharose 4B親和層析,獲得兩種純化的高分子CPIs,即ConA不吸附部分a-1和吸附部分的糖蛋白a-2。二者分別被純化了102.62 倍和274.28 倍,酶活回收率分別為2.02%和1.42%。通過TSK G2000 SWXL凝膠過濾高效液相色譜結(jié)合十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳及其反相酶譜法分析,表明a-2及再次經(jīng)高效液相色譜法回收的a-1在電泳圖上均呈單一帶,a-2為單一峰,且a-1的分子質(zhì)量為139 ku,a-2的分子質(zhì)量為92 ku。二者均能抑制半胱氨酸蛋白酶(木瓜蛋白酶和鰱魚組織蛋白酶L)但不抑制絲氨酸蛋白酶(胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)。根據(jù)a-1和a-2的分子質(zhì)量及抑制活性特征和糖蛋白特性,推測二者可能為鰱魚卵Kininogens的不同形式。
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