領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：優(yōu)化重組蛋白LuxS誘導(dǎo)表達(dá)及純化條件，提高具有生物活性的重組蛋白LuxS的表達(dá)量，為體外合成自誘導(dǎo)物2（autoinducer-2，AI-2）奠定基礎(chǔ)。方法：采用單因素試驗(yàn)，優(yōu)化誘導(dǎo)培養(yǎng)基、誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)前菌體生物量、誘導(dǎo)時(shí)間以及異丙基硫代半乳糖苷（isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）的濃度；采用Ni-NTAPurification System對重組蛋白進(jìn)行純化，比較Native Elution Buffer的咪唑濃度和pH值對重組蛋白純化的影響，確定最佳的Native Elution Buffer；對比蛋白與樹脂結(jié)合時(shí)不同緩沖液的純化效果，選擇最優(yōu)的結(jié)合緩沖液。結(jié)果：重組蛋白的最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件為：以LB培養(yǎng)基為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，菌液OD600 nm為0.6～0.8，IPTG濃度為0.1 mmol/L，誘導(dǎo)溫度為37 ℃，誘導(dǎo)時(shí)間為12 h。采用添加3 mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液作為蛋白與樹脂結(jié)合的緩沖液，含500 mmol/L咪唑的Native Elution Buffer（pH 6.5）作為蛋白洗脫液。使用分離獲得的LuxS蛋白合成的AI-2生物活性約為陽性對照的6 倍。結(jié)論：本研究成功優(yōu)化了重組蛋白LuxS的誘導(dǎo)表達(dá)及純化條件，獲得了具有生物活性的重組蛋白，并成功合成了AI-2。
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