采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)分析不同劑量酪蛋白糖巨肽(casein glycomacropeptide,CGMP)對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響,揭示乳源CGMP是否有增殖腸道關(guān)鍵益生菌的功能。選用50 只健康BALB/c小鼠,隨機分為對照組,安慰組(灌胃生理鹽水0.2 mL),乳源CGMP低、中、高劑量組(灌胃等體積不同質(zhì)量濃度的乳源CGMP),灌胃周期為2 周。于灌胃后第0、3、5、7、9、11、15天及停止灌胃后1 周(第21天)采集的小鼠新鮮糞便,并進行糞便菌體基因組DNA抽提。依據(jù)雙歧桿菌的16S rRNA基因序列設(shè)計5 對種屬特異性引物,以兩歧雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)CICC6071的基因組DNA作為標(biāo)準(zhǔn)品,進行梯度稀釋制作標(biāo)準(zhǔn)曲線;分析樣品PCR擴增產(chǎn)物的熔解曲線,評價反應(yīng)的特異性。結(jié)果表明:Real-time PCR可準(zhǔn)確定量小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量;且灌胃中劑量乳源CGMP可以促進小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌的增殖,在灌胃第11天時小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量達到最高值,即乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌的增殖作用存在劑量選擇性。
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