新鮮豬肝經(jīng)勻漿、緩沖液抽提、硫酸銨分級(jí)沉淀、DEAE-Sepharose離子交換層析及Superdex-200凝膠過(guò)濾層析,獲得電泳純的乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase,ADH)。純化結(jié)果顯示:該酶比活力為1 622.33 U/mg,回收率為29.05%,純化倍數(shù)為34.58;該酶分子質(zhì)量約為171.79 kD,亞基分子質(zhì)量約為43.68 kD。ADH酶學(xué)性質(zhì)研究顯示:最適反應(yīng)溫度和pH值分別為45 ℃和10.0;在25~45 ℃及pH 7.5~9.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好;最適條件下測(cè)得該酶對(duì)乙醇的Km值為19 mmol/L;正丁醇、氯仿、異丙醇、十二烷基硫酸鈉、草酸、Zn2+、Cu2+、Ag+對(duì)該酶的抑制作用最強(qiáng),Mg2+對(duì)該酶有激活作用,EDTA對(duì)該酶有雙重作用。
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