為建立原生質(zhì)體介導的粗壯脈紋孢菌遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),本研究主要考察了復合酶解液、菌齡及酶解時間對粗壯脈紋胞菌原生質(zhì)體生成及再生的影響。結(jié)果表明,粗壯脈紋胞菌孢子懸液接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potatodextrose agar,PDA)液體培養(yǎng)基中,30 ℃條件下?lián)u床培養(yǎng)10 h的菌絲,采用0.5 g/100 mL蝸牛酶+0.5 g/100 mL溶壁酶+1 g/100 mL纖維素酶的復合酶解液、30 ℃條件下酶解10 h,粗壯脈紋胞菌原生質(zhì)體生成及再生最為適合。在此條件下,原生質(zhì)體生成數(shù)可達4.53×106 個,38#再生培養(yǎng)基中的再生數(shù)可達1.41×106 個,再生率達31.71%,聚乙二醇介導PAKHB載體轉(zhuǎn)化NC原生質(zhì)體,每微克質(zhì)粒可獲得8 個以上的轉(zhuǎn)化子。
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