本研究從濃香大曲中篩選出1 株嗜熱真菌HBFH10,經(jīng)鑒定為小孢根霉(Rhizopus microsporus)。利用兼并引物,從菌株HBFH10中獲得1 個新型甘露聚糖酶基因(RmMan134),該基因全長552 bp,無內(nèi)含子,編碼183 個氨基酸和1 個終止密碼子。RmMan134酶蛋白分子由1 個信號肽序列(1~19 aa)和GH134家族的催化區(qū)組成。經(jīng)異源表達(dá)后,重組RmMan134的最適反應(yīng)溫度為50 ℃,最適反應(yīng)pH值為6.0,具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和pH值穩(wěn)定性。RmMan134成熟蛋白分子質(zhì)量約為18.5 kDa,存在糖基化修飾。經(jīng)動力學(xué)性質(zhì)測定,以魔芋膠為底物時,該酶的Vmax為57.1 μmol/(min·mg),Km為0.66 mg/mL。重組酶RmMan134對橙汁的澄清效果最為明顯,澄清度提高了23.8%,其次蘋果汁提高了11%,桃汁提高了7%左右。除此之外,添加重組酶使得葡萄汁的出汁率提高了7%左右。綜上所述,甘露聚糖酶RmMan134在果汁加工中具有較好的應(yīng)用前景。
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