利用甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)可特異性捕獲Cu2+的特點(diǎn),構(gòu)建Mb耦合脂肪酶生物傳感器,并利用熒光光譜、紫外光譜、傅里葉變換紅外光譜以及透射電子掃描電鏡對制備成功的固定化脂肪酶(Lipase@AuNPs)結(jié)構(gòu)和形貌進(jìn)行表征。借助生物傳感器監(jiān)測脂肪酶水解三油酸甘油酯時電信號的響應(yīng)情況,Cu2+與Mb特異性接合并在脂肪酶周圍產(chǎn)生富集現(xiàn)象,抑制脂肪酶的催化活性,電流強(qiáng)度顯著下降,從而實(shí)現(xiàn)對Cu2+的快速定性、超痕量反定量檢測。結(jié)果表明:采用差分脈沖伏安法測得最優(yōu)檢測體系為底物三油酸甘油酯溶于Tirs-HCl緩沖溶液的質(zhì)量濃度2 g/100 mL、緩沖液pH 7.5,當(dāng)Cu2+濃度為1~100 nmol/L范圍內(nèi)時,傳感器電流差值與其線性關(guān)系良好,回歸方程為y=0.228x+0.774 8,R2=0.995 0,檢出限為0.03 nmol/L(RSN=3)。本研究建立的新型脂肪酶生物傳感器檢測Cu2+的方法,具有較高的靈敏度、專一性和穩(wěn)定性,為實(shí)現(xiàn)食品中痕量、超痕量的重金屬檢測提供一定的參考。
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