采用熒光光譜法研究不同pH值(3.0、5.2、7.4)條件下葉黃素與牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的相互作用,利用數(shù)學(xué)模型計(jì)算得到二者的猝滅常數(shù)和熱力學(xué)參數(shù)等,分析葉黃素與BSA的熒光猝滅現(xiàn)象及蛋白構(gòu)象的變化,最后通過(guò)位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)和分子模擬技術(shù)確定了二者的結(jié)合位點(diǎn)。熒光光譜表明,不同pH值條件下葉黃素對(duì)BSA均產(chǎn)生熒光猝滅效應(yīng),在298 K時(shí),pH 7.4的猝滅常數(shù)最大,結(jié)合常數(shù)較大;熱力學(xué)參數(shù)和分子對(duì)接結(jié)果表明,葉黃素與BSA間的作用力主要是疏水相互作用;同步熒光光譜表明BSA的構(gòu)象在葉黃素與pH值的共同作用下發(fā)生改變;位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)和分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)表明,pH 7.4和pH 5.2時(shí),二者的結(jié)合位點(diǎn)在亞結(jié)構(gòu)域IIA和IIIA之間,但更接近于Sudlow’s site II;pH 3.0時(shí),結(jié)合位點(diǎn)不在亞結(jié)構(gòu)域IIA及IIIA附近。結(jié)果表明,pH值對(duì)葉黃素和BSA的相互作用有影響,這為蛋白質(zhì)與生物活性成分的相互作用提供一定的理論依據(jù)。
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