研究羥基紅花黃色素A(HSYA)對過氧化氫(H2O2)所致L02人胎肝細胞內(nèi)谷胱甘肽氧化的影響。采用5,5’-二硫代雙硝基苯甲酸(DTNB)衍生化法,用高效液相色譜(HPLC)法測定L02細胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)濃度,二硫蘇糖醇(DTT)還原細胞內(nèi)氧化型谷胱甘肽(GSSG)后測定細胞內(nèi)總GSH含量,以此計算出細胞內(nèi)GSSG含量。HSYA預處理L02人胎肝細胞24h,再加入H2O2孵育1h后,利用HPLC測定細胞內(nèi)GSH和GSSG水平及GSSG/GSH比值的變化。結果表明:GSH在0.1~2mmol/L范圍內(nèi)線性關系良好,最低定量限為0.1mmol/L,批內(nèi)、批間精密度均小于10%,樣品的回收率均在95%~105%之間。此測定GSH方法準確、精密、重復性好、穩(wěn)定性高,可用于細胞中GSH和GSSG的測定。H2O2處理后L02細胞內(nèi)GSSG/GSH比值明顯升高,HSYA能夠降低L02細胞中GSSG水平,使GSSG/GSH的比值下降,表明HSYA能夠改善H2O2所致L02細胞的氧化脅迫狀態(tài),保護細胞免受氧化損傷。
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