目的:用右旋糖酐和單甲氧基聚乙二醇(mPEG)化學(xué)修飾純化后的小麥酯酶,并考察修飾酶的酶學(xué)性質(zhì)。方法:分別采用高碘酸鈉和三聚氯氰活化右旋糖酐和mPEG,得到修飾的小麥酯酶,通過紅外光譜表征修飾酶基團(tuán)變化,測試修飾酶的反應(yīng)動力學(xué)參數(shù),并考察溫度及pH值對修飾酶活力的影響。結(jié)果:修飾后的酶與純化酶相比,修飾酶對底物乙酸-1-萘酯的親和力增強(qiáng),并保留了大部分酶的活力,右旋糖酐修飾酶活保持率在67.1%,mPEG修飾酶的酶活保持率達(dá)到87.7%。另外,右旋糖酐修飾酶的最適溫度和pH值分別為35℃和6.4,Km和Vmax分別為2.00mmol/L和2000μg/min,而mPEG修飾酶的最適溫度和pH值為35℃和6.8,Km和Vmax為1.25mmol/L和2500μg/min。兩種修飾酶在耐熱性、耐酸堿性等方面都優(yōu)于純化酶,mPEG修飾酶的最適pH值發(fā)生改變。結(jié)論:修飾酶較純化酶更穩(wěn)定,具有一定的實(shí)用意義。
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