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一步法逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測食源性沙門氏菌
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 175 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 周曉清,李苗云,劉 杰,趙改名,柳艷霞,田 瑋,黃現(xiàn)青,高曉平
關(guān)鍵詞: 沙門氏菌;RNA;逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
摘要:

建立采用一步法逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測食源性沙門氏菌的檢測方法并初步應(yīng)用。以沙門氏菌的invA基因為目的基因設(shè)計引物,優(yōu)化PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件,同時進行特異性、靈敏度和重復(fù)性實驗;并用所建立的方法檢測人工污染的豬肉樣品,通過與傳統(tǒng)計數(shù)方法的結(jié)果對比驗證所建立方法的適用性。優(yōu)化后的逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCR檢測條件為:42℃、5min,95℃、10s,95℃、5s,67℃、34s;此步驟進行40個循環(huán);上、下游引物的最佳終濃度均為0.16μmol/L。結(jié)果表明:該方法的特異性為100%;重復(fù)性良好;對沙門氏菌的檢測下限為150CFU/mL;檢測人工污染食品樣品的結(jié)果100%符合傳統(tǒng)計數(shù)結(jié)果。建立的檢測方法具有快速、靈敏、簡單等特點,非常適用于食源性沙門氏菌的檢測。

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