為實現(xiàn)對嬰幼兒配方羊乳粉中乳源成分的準(zhǔn)確判別,將基因檢測作為初篩方法,以蛋白質(zhì)雙向電泳作為確證方法,研究該技術(shù)路線下對乳源成分檢測的靈敏度、準(zhǔn)確性等指標(biāo)。優(yōu)化建立的基于嗜熱蛋白酶的一步式DNA提取法,僅需通過溫控反應(yīng)在17 min內(nèi)完成DNA步驟,極大縮短了樣品前處理時間;建立的快速實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)程序僅需28 min 26 s即可完成檢測。通過牛(家牛、水牛、牦牛)、羊(山羊和綿羊)、山羊、綿羊單一乳源成分,以及哺乳動物內(nèi)參照檢測體系,可以實現(xiàn)對低至10~100 pg/μL DNA的檢測,對混合樣品中牛源性成分檢測的靈敏度可達1%(m/m)。然后結(jié)合雙向電泳技術(shù)進一步確證產(chǎn)品的蛋白成分來源,可以判定牛基因檢測陽性的樣品是否含有來源于牛乳酪蛋白或乳清蛋白,進而對樣品的真實性進行判定。real-time PCR法和雙向電泳技術(shù)聯(lián)合檢測解決了以往嬰幼兒配方乳粉檢測中因配料復(fù)雜乳源判別困難的瓶頸問題。
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