為探索六堡茶發(fā)酵過程中多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)的來源及其酶學(xué)活性,采用不同pH值緩沖液、保護劑和液料比對發(fā)酵前后六堡茶PPO進行提取,通過(NH4)2SO4沉淀、透析和Sephadex?G-100凝膠過濾層析純化PPO。結(jié)果表明:從六堡茶中分離純化得到2?個PPO同工酶,分子質(zhì)量分別為59?kDa(PPO1)和70?kDa(PPO2),其中PPO1為茶樹PPO,PPO2由發(fā)酵過程中微生物產(chǎn)生。底物鄰苯二酚對PPO1和PPO2的最適濃度為0.5?mol/L,PPO1和PPO2的最適pH值分別為6.5和6.0,最適溫度分別為40?℃和35?℃,PPO1的熱穩(wěn)定性優(yōu)于PPO2,兩者在90?℃條件下處理5?min幾乎完全滅酶。研究表明,六堡茶發(fā)酵后會產(chǎn)生新的同工酶,二者共同提高黑茶品質(zhì),為黑茶加工條件的控制和黑茶PPO的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。
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