建立用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測食品中熒光假單胞菌的方法。分別針對(duì)16~23S rRNA基因間隔區(qū)序列、gyrB基因以及通過生物信息學(xué)方法發(fā)掘到的4個(gè)種特異性基因設(shè)計(jì)6對(duì)檢測引物,通過初步特異性實(shí)驗(yàn),篩選出一對(duì)種特異性最佳的引物。最終建立以gyrB基因?yàn)闄z測靶點(diǎn)的PCR擴(kuò)增體系,并對(duì)體系進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明:該方法可特異檢測熒光假單胞菌的存在,純DNA檢測靈敏度為14.9fg/μL (2~3拷貝/μL),純培養(yǎng)物檢測靈敏度為2.8×102CFU/mL。豆奶樣品經(jīng)15h充分增菌可提高檢測靈敏度至0.28CFU/25g。
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