為構(gòu)建快速檢測乳制品中黃曲霉毒素M1(AFM1)的直接競爭-酶聯(lián)免疫吸附(dc-ELISA)體系,將辣根過氧化物酶(HRP)與高純度抗AFM1單克隆抗體進行偶聯(lián)后對其與AFM1競爭性反應(yīng)條件進行優(yōu)化,并利用AFM1污染標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等對檢測體系的靈敏度和精確性進行驗證。結(jié)果當(dāng)AFM1-BSA包被質(zhì)量濃度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀釋2000倍時dc-ELISA檢測AFM1的IC50為0.75μg/L,檢測范圍為0.015~4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鮮奶樣品中檢測回收率平均為80%,dc-ELISA可滿足鮮乳中AFM1國家殘留限量標(biāo)準(zhǔn)0.5μg/kg的檢測要求。該體系可應(yīng)用于鮮奶制品中AFM1大于0.5μg/kg污染樣品的快速初篩。
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