目的:建立快速、簡便測定鮮牛奶、轉(zhuǎn)基因牛奶和人乳中乳鐵蛋白的方法。方法:在對樣品脫脂和去除酪蛋白時,水洗乳脂、酪蛋白以提高乳鐵蛋白的回收率。通過十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分離乳清蛋白,薄層掃描法定量。對電泳和薄層掃描的條件進行優(yōu)化,電泳使用1.0mm×10齒的試樣格、分離膠質(zhì)量濃度12g/mL、分離電壓100V、上樣量5μL、染色3h、脫色2h;薄層掃描采取鋸齒、雙波長、透射的掃描方式,Y步長和擺幅寬分別為0.1mm和8mm。結(jié)果:可以分離不同來源乳中的乳鐵蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白;乳鐵蛋白加標回收率分別為104.53%、108.37%,同板精密度RSD值為3.1003%和1.8151%,在100~2000μg/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.9988和0.9990。結(jié)論:此方法可以用于3種乳中乳鐵蛋白的測定。
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