為研究毛柄金錢菌gpd啟動子驅(qū)動福壽螺纖維素酶基因(mfc)在大型絲狀真菌中的表達效果,本實驗通過構(gòu)建毛柄金錢菌gpd啟動子驅(qū)動的mfc基因的真核表達載體,采用PEG(polyethylene glycol)介導法將目的基因重組進色氨酸營養(yǎng)缺陷型灰蓋鬼傘菌染色體,對轉(zhuǎn)化子進行PCR、Southern blotting、RT-PCR等分子鑒定,通過測定濾紙酶、CMC酶和木聚糖酶的活力考察mfc的表達效果。結(jié)果表明:多功能纖維素酶基因整合入灰蓋鬼傘基因組中,毛柄金錢菌gpd啟動子能夠高效驅(qū)動mfc基因的表達,其中酶活力最高的工程菌株為Cfvlm9,其濾紙酶活力、CMC酶活力和木聚糖酶活力分別為21.5、44、235U/mL,分別是對照的1.79倍、1.6倍和2.97倍。
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