領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
利用乳酸鏈球菌肽(Nisin)抗性基因常與乳糖利用基因位于同一質(zhì)粒上這一特性，在含300IU/mL Nisin和質(zhì)量濃度為0.004g/100mL溴甲酚紫的選擇性培養(yǎng)基上，從新鮮牛奶中初篩到5株Nisin抗性菌株。經(jīng)脫脂乳培養(yǎng)基培養(yǎng)、革蘭氏染色和鏡檢，初步確定為乳球菌。分別以5株抗性菌株的基因組和質(zhì)粒DNA為模板，采用PCR對其Nisin抗性基因(NSR)保守序列進行了擴增，從其中3株抗性菌株(分別命名為N1、N2、N3)的質(zhì)粒DNA上得到大小約400bp的目的基因產(chǎn)物。經(jīng)16S rDNA鑒定，進一步確定3株抗性菌株均為乳酸乳球菌。分別以N1、N2、N3的質(zhì)粒為模板，采用PCR擴增其全長NSR基因，均得到大小約1000bp的目的產(chǎn)物。將從N1得到的NSR基因全長產(chǎn)物與pMD-19T進行連接測序，結(jié)果顯示，其與已發(fā)表序列的相似性達99%，可確定其為NSR基因，且位于抗性菌株N1的質(zhì)粒上。
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