擴展青霉(Penicillium expansum)會導致水果腐爛變質,危害消費者身體健康,是采后水果常見的腐敗菌,研究愛媛類芽孢桿菌(Paenibacillus ehimensis)抗菌肽對擴展青霉孢子的抑制作用機制具有重要意義。本實驗采用微量二倍稀釋法和時間-殺菌曲線測定抗菌肽對擴展青霉孢子的抑菌活性,采用掃描電子顯微鏡和透射電子顯微鏡觀察抗菌肽對擴展青霉孢子超微結構的影響,采用熒光探針分析抗菌肽對擴展青霉細胞膜和活性氧累積的影響,以探究愛媛類芽孢桿菌抗菌肽對擴展青霉孢子的抑制作用機制。結果顯示,抗菌肽對擴展青霉孢子的最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)為3.5 AU/mL。經0.5、1 MIC和2 MIC抗菌肽處理的擴展青霉孢子萌發(fā)率降低顯著(P<0.05),與空白對照組相比,分別降低了28.30%、84.57%和100%。抗菌肽作用后,導致擴展青霉孢子凹陷嚴重、內容物泄漏、形態(tài)和結構發(fā)生改變,且抗菌肽使擴展青霉的細胞壁受到損傷,導致堿性磷酸酶外泄。抗菌肽作用擴展青霉后,消散了細胞膜電勢,且消散程度呈濃度依賴性;增加了細胞膜滲透性,導致K+外泄;增加了細胞膜的流動性,使DPH熒光強度顯著降低(P<0.05);破壞了細胞膜完整性,使SYTOX-Green熒光強度和PI沾染率升高。同時,經1、2 MIC抗菌肽處理的擴展青霉孢子DCFH-DA熒光強度顯著增大(P<0.05),細胞內出現(xiàn)活性氧累積,影響了擴展青霉孢子正常的生理代謝。綜上,抗菌肽對擴展青霉孢子抑制作用的靶位點主要為細胞膜和活性氧代謝。
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