使用反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)克隆了轉(zhuǎn)基因玉米59122的外源基因與玉米基因組之間的兩段側(cè)翼序列,并據(jù)其左側(cè)側(cè)翼序列設(shè)計了具品系特異性的引物,運(yùn)用半巢式PCR技術(shù)建立了59122的品系特異性二重PCR檢測方法,擴(kuò)增片段100bp,橫跨pat終止子與轉(zhuǎn)基因玉米側(cè)翼基因之間。以轉(zhuǎn)基因玉米59122、MON863、MON810、GA21、NK603,轉(zhuǎn)基因大豆Roundup Ready和轉(zhuǎn)基因油菜GT73等為材料,證明本方法與其他轉(zhuǎn)基因作物具有高特異性。本方法在檢測59122時,確定出連接體系中線性DNA的最佳質(zhì)量濃度為1ng/μL左右,檢出限達(dá)到0.1%,靈敏度為38個單倍體基因組拷貝數(shù)。因此可準(zhǔn)確、快速、高效地檢測轉(zhuǎn)基因玉米及其產(chǎn)品,或作為常規(guī)PCR定性檢測后的驗證方法。
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